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现在对武汉等10多个地区都在进行病毒IgG抗体检测,对国外归国人员及一些复工复产单位的员工也进行检测,如果阳性一般提示感染过病毒,但是确实会有假阳性,就是没感染过病毒,但结果提示感染过。
坦率地讲,这种假阳性很难完全避免,需要对结果进行科学的解读与认识,一般也需要结合IgM抗体进行动态检测。
造成特异IgG免疫测定假阳性,通常有以下两方面的原因:
1.阳性判断值附近的弱阳性,可能是假阳性检测判断阳性与阴性,会设定一个分界值,高于这个值判断为阳性,一些刚刚高于阳性判断值附近的弱阳性,很多并不一定就是阳性,有可能就是假阳性;
胶体金试纸条检测是通过肉眼观察颜色有否来判断阳性和阴性,不存在阳性判断值的问题,但也会存在不同检测者判断的差异。
化学发光免疫试验(CLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)需要设定阳性判断值,一般是通过测定大量的阴性人群(数千份)和一定数量(数百份)的已知阳性人群标本,得到一个分布,用统计学方法确定阳性判断值,通常为假阳性和假阴性均较低且达到平衡状态时的测定信号,如OD值或发光值。
因此,不可避免地处于其周边阳性一侧的结果,会有一部分弱阳性,而实际为假阳性。
依据阴性和阳性人群检测值的分布确定阳性判断值
2.血样中存在导致假阳性的干扰物质1)内源性干扰物
一般包括类风湿因子、嗜异性抗体、补体、因使用鼠源抗体治疗或诊断诱导的抗鼠Ig 抗体等。在日常的临床血清(浆)标本中,有相当比例的标本不同程度的含有上述各种干扰物质,从而可能导致测定结果的假阳性。
(1)类风湿因子(Rheumatoid factors,RF)
在类风湿患者、其他疾病包括部分正常人血清中,常含有较高或不同浓度的类风湿因子,其通常为IgM型,亦有IgG和IgA型,RF具有与变性IgG产生非特异结合的特点,因此在免疫测定中,其可与固相上包被的特异抗体IgG以及随后加入的标记的特异抗体IgG结合,从而出现假阳性结果。
(2)嗜异性抗体(Heterophilicantibodies)
人类血清中可能会含有抗啮齿类动物(如鼠、马、羊等)的抗体,即天然嗜异性抗体。有研究表明,天然的嗜异性抗体(IgG)可分为两类,一类(85%的假阳性由其引起)可结合于山羊、小鼠、大鼠、马和牛IgG的Fab区域,但不与兔IgG的Fab区结合。另一类(15%的假阳性由其引起)可结合于小鼠、马、牛和兔IgG的FC区表位,但不与山羊和大鼠IgG的FC区表位结合。嗜异性抗体可通过交联固相和标记的单抗或多抗而出现假阳性反应。
(3)补体
在固相免疫测定中,来自哺乳动物的固相特异抗体和标记二抗均可以激活人补体系统。因为其在固相吸附及结合过程中,抗体分子发生变构, Fc段的补体C1q结合位点被暴露出来,这样C1q就成为一个中介物将二者交联起来,从而出现假阳性结果。
(4)因使用鼠抗体治疗或诊断诱导的抗鼠Ig抗体
在临床上,有使用鼠源性单克隆抗体进行癌症等的靶向治疗,或者使用放射性核素标记鼠源性单克隆抗体进行影像诊断等,均有可能使相应患者体内产生抗鼠抗体。这种抗鼠抗体对使用鼠源性单克隆抗体的免疫测定,可产生假阳性结果。
(5)溶菌酶
溶菌酶可与等电点较低的蛋白有强的结合能力。免疫球蛋白等电点约为5,因此,在免疫测定中,溶菌酶可在包被的IgG和标记的IgG间形成桥接,从而导至假阳性。
2)外源性干扰物
包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长和标本凝固不全等。
(1)标本溶血
如果样本中的红细胞破了,溶血导致血红蛋白释放,由于血红素基团有类似过氧化物的活性,因此,在以辣根过氧化物酶(HRP)为标记酶的ELISA和CLIA中,如血清标本中血红蛋白浓度较高,则其在温育过程中会吸附于固相,从而与后面加入的HRP底物反应显色或发光,导至假阳性。
(2)标本贮存时间过长
标本在2~8℃下保存时间过长,IgG可聚合成多聚体,在间接法免疫测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性。
答:
mbl是甘露糖结合凝集素(MBL),结构与C1q 相似,在病原微生物感染早期,由肝细胞合成和分泌,是急性期蛋白的一种。mbl是可直接识别多种病原生物表面的N氨基半乳糖或甘露糖,进而可依次活化MASP1,MASP2,C4,C2,C3,形成一系列酶促反应。其构成的途径称为MBL激活途径。补体激活途径的一种,亦称凝集素途径。
mbl没有越南产的。补体经典途径的主要激活物是免疫复合物。
补体激活的经典途径由抗原抗体复合物激活,C1q最先与抗原抗体复合物结合继而依次激活C4、C2、C3形成C5转化酶,启动补体活化的级联酶促反应。
这两个是不同的指标,肌酐反映的是肾功能水平;C1q是一个免疫炎症指标,提示某种自身免疫性疾病可能。这种自身免疫性疾病有可能是肾功能不全的原因,也就是肌酐升高的原因。但两者没有必然联系。
补体系统各成分通常多以非活性状态存在于血浆之中,当其被激活物质活化之后,才表现出各种生物学活性。补体系统的激活可以从C1开始;也可以越过C1、C2、C4,从C3开始。前一种激活途径称为经典途径(classical pathway)或替代途径。
“经典”,“传统”只是意味着,人们早年从抗原体复合物激活补体的过程来研究补体激活的机制时,发现补体系统是从C1开始激活的连锁反应。从种系发生角度而言,旁路途径是更为古老的、原始的激活途径。从同一个体而言,在尚未形成获得性免疫,即未产生抗体之前,经旁路途径激活补体,即可直接作用于入侵的微生物等异物,作为非特异性免疫而发挥效应。
金阳明
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